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腺病毒包裝

簡(jian)要(yao)描述:腺病毒(Adenovirus)是目前(qian)*可(ke)靠的重(zhong)組病毒表達系統之一,可(ke)用于在哺乳細胞中瞬(shun)時及(ji)高水平(ping)地表達shRNA或目的蛋白。

  • 產品型(xing)號:
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2023-07-20
  • 訪(fang)  問(wen)  量:1485
       腺病(bing)(bing)毒(du)(Adenovirus)是(shi)目前可(ke)(ke)靠(kao)的重(zhong)組(zu)病(bing)(bing)毒(du)表達(da)系統之一,可(ke)(ke)用于(yu)在哺乳細胞中瞬時(shi)及高水平地表達(da)shRNA或目的蛋(dan)白。其具備以下(xia)優(you)點(dian):
  1. 宿主范圍廣。腺病毒可感染一系列(lie)哺乳(ru)動物細胞(bao),除(chu)可感染幾乎所(suo)有人的(de)細胞(bao)類型外(wai),還可感染包括大鼠(shu)、小鼠(shu)、兔、豬、羊、猴、雞等(deng)物種。
  2. 因腺病(bing)毒的感染(ran)不依(yi)賴細(xi)胞周期,故其(qi)既可(ke)以(yi)感染(ran)增(zeng)殖細(xi)胞也可(ke)以(yi)感染(ran)非增(zeng)殖細(xi)胞。
  3. 腺(xian)病毒(du)具有嗜上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)特性,因(yin)大多數(shu)腫瘤細(xi)胞(bao)均(jun)屬于(yu)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao),這使得腺(xian)病毒(du)非常適(shi)合(he)應用于(yu)基因(yin)治療領域。
  4. 病毒滴(di)度高,可(ke)用于(yu)動物水平的實驗。
  5. 有較好的生物安全性。腺(xian)病毒(du)(du)(du)攜(xie)帶的基(ji)因(yin)不會(hui)(hui)整合到宿主細胞(bao)基(ji)因(yin)組中(zhong);實驗中(zhong)雖然(ran)會(hui)(hui)有一定機率(lv)出現RCA(即復制(zhi)型腺(xian)病毒(du)(du)(du)),但(dan)由于大多數成人(ren)體內都有針對腺(xian)病毒(du)(du)(du)的抗體,所以一般危害不大。

技(ji)術要點

重組腺病毒的包裝制備:重組腺病毒是從由侵染色斑組成單位(pfu)中分離獲得的。一個單色斑是線性載體質粒轉染后在20×15 cm板上由293A細胞連續侵染后被挑選和擴增形成的。重組腺病毒可通過超速離心純化,并測定滴度及進行PCR鑒定。純化后重組腺病毒的滴定濃度為1010pfu/ml,獲得的量為2-4 ml。
重組腺病(bing)毒的(de)特性:一般的(de),單個腺病(bing)毒通(tong)常是(shi)在30×150mm細胞(bao)培養(yang)皿中制(zhi)備的(de)。
獲得(de)量:1×10病毒顆粒/細胞
滴(di)定濃度:1×1010~1×1012個病毒基因組/ml
zui終體積:1 ml純化后的病毒液(儲存于PBS)
儲存(cun):批量儲存的*條件為-80°C
幾(ji)種(zhong)病毒載體(ti)的(de)區別(bie):

腺病(bing)毒表達(da)系統
慢(man)病毒表達(da)系統
逆轉錄(lu)病毒(du)
病(bing)毒(du)基因組成
雙(shuang)鏈(lian)DNA
單(dan)鏈RNA
單鏈RNA
載導容量(liang)
< 8 kb
< 8 kb
< 6kb
基因(yin)整合(he)功(gong)能
無。病毒(du)基因組游(you)離于宿主基因組外,瞬時表達(da)外源基因
有。病毒基因組(zu)整(zheng)合于宿主基因組(zu),長時間、穩定表達外源基因
有。
表達豐度(du)
高水平(ping)表達
中(zhong)
中(zhong)
表(biao)達時間
快(1-2天)
慢(man)(2-4天)
快(1-2天)
感染細(xi)胞類型
分裂和不分裂細胞
分(fen)裂(lie)和(he)不分(fen)裂(lie)細胞。適用于難轉(zhuan)染細胞
感染(ran)分(fen)裂細胞,但在干細胞中表達效(xiao)率(lv)低(di)
滴度TU/ml
10^12
10^9
10^9
四環素誘導系統(tong)
不可以(yi)
TET-ON , TET-OFF
不可以(yi)
毒性作用
細胞(bao)毒性
遺傳毒(du)性(xing)
遺(yi)傳毒性(xing)
免疫原性
高免疫原(yuan)性
低免疫(yi)原性(xing)
低免疫原(yuan)性
動物模型
不能(neng)得到轉基因動物
可產生轉基(ji)因動物(wu),效率(lv)達50以上
可以(yi),但很難
安全系數
能否用于MIRCORNA
可(ke)以
可(ke)以
不可以
RNAi
病毒進入細胞往往引(yin)起細胞內干(gan)擾素(su)反應,不適合做RNAi實(shi)驗
適合,是RNAi實(shi)驗的優(you)選(xuan)工具
可(ke)以用作RNAi實(shi)驗
基因過(guo)表達
包裝容量較(jiao)大(da)。可以滿足較(jiao)大(da)基(ji)因(yin)的(de)包裝,是過表達基(ji)因(yin)的(de)優選工具
包(bao)裝(zhuang)容量有(you)限(xian),過表達的基(ji)因(yin)過大時,病毒滴度受到(dao)影(ying)響
包裝(zhuang)容量有限,過表達的基因過大時,病毒滴(di)度(du)受到影響
常見應用
1、體外細胞基(ji)因轉導2、基(ji)因治療(liao)
1、體外細胞基因(yin)轉(zhuan)導2、基因(yin)治療
體外(wai)細胞基因轉導(dao),突變篩選,功能基因庫構建 

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