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DNA抽提和純化

簡要描述:DNA抽提和純化(hua)主(zhu)要是(shi)CTAB方(fang)法(fa)(fa),其(qi)他的方(fang)法(fa)(fa)還有物理方(fang)式如玻璃珠(zhu)法(fa)(fa)、超聲(sheng)波法(fa)(fa)、研(yan)磨法(fa)(fa)、凍(dong)融法(fa)(fa)。

  • 產品型號:
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新(xin)時間:2023-07-20
  • 訪  問(wen)  量(liang):1436
       DNA抽提和純化主要是CTAB方法,其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。化學方式如異硫氰酸胍法、堿裂解法。生物方式:酶法。根據核酸分離純化方式的不同有;硅質材料、陰離子交換樹脂等。

  DNA抽(chou)提和純化總的原(yuan)則:
  1、保證核酸一(yi)級結(jie)構的完整性(xing);
  2、核酸樣品中不(bu)應(ying)存在對酶(mei)有抑制作用的有機溶劑和(he)過高濃度(du)的金屬離子(zi);
  3、其他生物大分子如蛋白質、多糖和脂類分子的污染應降低到zui低程度。

  方法介紹:
  一(yi)、酚(fen)抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細胞,消化蛋白,然后(hou)用酚(fen)和酚(fen)-氯DNA大小為(wei)100-150kb
  二(er)、甲(jia)酰胺(an)解聚法:破(po)碎細胞同上,然后用高(gao)濃度(du)甲(jia)酰胺(an)解聚蛋白質與DNA的結合,再透析獲(huo)得DNA可得DNA200kb左右。
  三、玻璃(li)棒纏繞(rao)法:用鹽酸胍裂解細(xi)胞(bao),將裂解物鋪于乙(yi)醇上,然后(hou)用帶鉤或(huo)U型(xing)玻璃(li)棒在界面輕攪(jiao),DAN沉淀(dian)液繞(rao)于玻棒。生成DNA約80kb。
  四、異丙(bing)醇沉(chen)淀法:基本同1法,僅用(yong)二倍(bei)容(rong)積(ji)異丙(bing)醇替代乙醇,可(ke)去除(chu)小分子RNA(在異丙(bing)醇中可(ke)溶狀態)
  五(wu)、表面(mian)(mian)活性(xing)劑快速制備法:用(yong)Triton X-100A或(huo)NP40表面(mian)(mian)活性(xing)劑破碎細胞,然(ran)后用(yong)蛋白(bai)酶K或(huo)酚(fen)去除蛋白(bai),乙醇(chun)沉淀或(huo)透(tou)析。
  六、加(jia)熱法快速制備(bei):加(jia)熱96℃-100℃,五分鐘,然后離心后取上清,可用于(yu)PCR反應(ying)。
  七、堿變性快速制(zhi)備:先用(yong)NaOH作用(yong)20分鐘(zhong),再(zai)加HCI中(zhong)和(he),離心后取上(shang)清,含少量DNA。

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