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siRNA干擾檢測服務

簡要描(miao)述:RNA干擾 (RNA interference, RNAi)技術,是將與內源mRNA 編(bian)碼區同源的小(xiao)片段(19 -23bp)外源雙鏈 RNA(siRNA)導入細胞中(zhong),引發(fa)細胞中(zhong)相應mRNA 高效(xiao)特異性降(jiang)解,從(cong)而(er)導致特定基因表(biao)達(da)沉(chen)默(knock down)的一種實驗技術。

  • 產品型號:
  • 廠商性質(zhi):生產廠家
  • 更新時間:2023-07-20
  • 訪  問  量:2595

siRNA干擾(rao)檢測(ce)服務

原理:RNA干擾 (RNA interference, RNAi)技術,是將與內源mRNA 編碼區同源的小片段(19 -23bp)外源雙鏈 RNA(siRNA)導入細胞中,引發細胞中相應mRNA 高效特異性降解,從而導致特定基因表達沉默(knock down)的一種實驗技術,其中通過構建表達載體表達siRNA是多種siRNA制備方法中*有可能進行長期基因沉默研究的方法,siRNA 載體可以在細胞內直接轉錄出shrna ,其干(gan)擾效果等同于(yu)siRNA ,而且(qie)能夠解決 siRNA干(gan)擾時間(jian)短(duan)的(de)(de)缺點(dian)。您(nin)只需提(ti)供需干(gan)擾基因的(de)(de)詳細信息,包括基因的(de)(de) mRNA 序(xu)列(lie),Genbank Accession No. 和(he)所屬物種(zhong),本公司負責設(she)計3條針對目(mu)的(de)(de)mRNA的(de)(de)siRNA 靶(ba)序(xu)列(lie),在短(duan)時間(jian)內構(gou)建三個可(ke)用(yong)于(yu)目(mu)的(de)(de)mRNA干(gan)擾實驗的(de)(de)siRNA 載體(ti)并為您(nin)進行后(hou)續的(de)(de)干(gan)擾實驗研究。

實驗流程

◇ 選擇siRNA表達載體 通過人工合成基因的方法將該序列克隆至Clontech公司的RNAi-Ready pSIREN系列表達載體中,該系列表達載體帶有Pol III(U6)啟動子,具有轉染效率高、操作簡單、rna沉默效果(guo)易(yi)于檢(jian)測等特點,客戶可根據需要進行選擇(ze)。

◇ 設計siRNA靶序列

◇ 根據客戶提交的目的mRNA序列,設計3條RNA干擾靶序列,靶序列一般(ban)為19-21nt 長。

◇ 對(dui)于每條選定(ding)的(de)siRNA 靶序列(lie),設(she)計 siRNA 正義鏈和(he)反義鏈,以 loop(9nt or 10nt) 相(xiang)連,形成穩(wen)定(ding)的(de)發卡RNA,稱為 shRNA(short hairpin RNA)。

◇ 合成模板 合成每條編碼 shRNA的DNA 模板,并連接到 siRNA 載體相應的多克隆位點之間。連接產物轉化DH5α大腸桿菌。

◇ 抽提陽性克隆質粒 公司試劑盒抽(chou)提陽性克隆載體(ti)并定量。

◇ 轉(zhuan)染細(xi)胞(bao) 質粒直(zhi)接轉(zhuan)染或通過(guo)病毒包裝后轉(zhuan)染細(xi)胞(bao),并對(dui)轉(zhuan)染細(xi)胞(bao)進行陽性鑒定和(he)轉(zhuan)代(dai)細(xi)胞(bao)株(zhu)的(de)培養。

◇ 干擾效果檢測

◇ 基(ji)因水平(ping)上檢測 提取RNA、反轉(zhuan)錄(lu)、Realtime PCR檢測干擾效果(客戶自(zi)備(bei)細胞系)。

◇ 蛋白(bai)水平(ping)上(shang)檢測 Western Blot檢測蛋白(bai)水平(ping)干擾效果(客(ke)戶自備一(yi)抗)。

服務周期及價格

服務內容

價格(¥)

周期

siRNA 載體構建(jian)1~3個

1800元/個

14個工作日

siRNA 載(zai)體構建3~10個

1500元/個

20個工作日

siRNA 載體構(gou)建10個以上

詢價

協商

細胞培養、轉染

5000元/基因

1~2周

基因水平上檢(jian)測干(gan)擾(rao)效果

詢價(jia)(視(shi)檢測數量商定(ding))

5~6周

蛋白水(shui)平上(shang)檢測干擾效果(guo)

詢價(jia)(視檢測數量商(shang)定)

5~6周

服務說明

◇ siRNA服務需(xu)客戶與我們共同(tong)討(tao)論實驗方(fang)案(an),并提(ti)供靶基因名稱、序(xu)列(lie)或GeneBank ID和希望插入載(zai)體(ti)的(de)名稱等(deng),免費(fei)為您設計siRNA序(xu)列(lie)。

◇ 由于構(gou)(gou)建的siRNA表達載(zai)體中插(cha)入(ru)的片段可(ke)以形成hairpin結(jie)構(gou)(gou),因此可(ke)能會(hui)影響測序。如果我們對質粒測序結(jie)果不理想時,將(jiang)對由質粒擴(kuo)增得到(dao)的PCR產(chan)物進行測序。

◇ 開(kai)始實驗時公司和客戶簽訂詳細的實驗技術(shu)服務合同、保(bao)密合同,客戶需預付合同金額(e)的50%作為預付款。

提供結果

實驗報(bao)告(gao)包括:siRNA序列、構建載(zai)體的測(ce)序報(bao)告(gao)、熒光(guang)定量PCR檢測(ce)報(bao)告(gao)、Western Blot圖片及全部實驗數據和詳細的實驗步驟。

 

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