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DNA CpG甲基化檢測服務

簡要(yao)描述:DNA甲(jia)基(ji)(ji)化(hua)是表(biao)觀遺傳修飾的(de)(de)(de)(de)主(zhu)要(yao)方(fang)式(shi),它(ta)不(bu)改變DNA的(de)(de)(de)(de)一級(ji)結(jie)構(gou),卻在(zai)細胞的(de)(de)(de)(de)發(fa)育(yu)、基(ji)(ji)因的(de)(de)(de)(de)表(biao)達、及基(ji)(ji)因組的(de)(de)(de)(de)穩定(ding)性中(zhong)起著(zhu)重要(yao)的(de)(de)(de)(de)作用。CpG島的(de)(de)(de)(de)高甲(jia)基(ji)(ji)化(hua)是腫(zhong)瘤中(zhong)存(cun)在(zai)的(de)(de)(de)(de)普遍現象,而啟(qi)動(dong)子(zi)CpG島的(de)(de)(de)(de)高甲(jia)基(ji)(ji)化(hua)是除(chu)突變和(he)缺失外腫(zhong)瘤中(zhong)抑癌(ai)基(ji)(ji)因失活(huo)的(de)(de)(de)(de)第(di)三種機制。因此,基(ji)(ji)因啟(qi)動(dong)子(zi)甲(jia)基(ji)(ji)化(hua)檢測在(zai)臨床診斷(如甲(jia)基(ji)(ji)化(hua)檢測與低劑量CT相結(jie)合)、藥物敏感(gan)性檢測等方(fang)面具有很高的(de)(de)(de)(de)應用價值。

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  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2023-07-19
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DNA CpG甲基化檢測

甲基化特(te)異性的PCR(methylation-specific PCR)應(ying)用

    DNA甲基(ji)化在人的(de)(de)正常發育、X染色體失活、衰老以及許多(duo)人類疾(ji)病(如發育畸形、癌癥、心血(xue)管疾(ji)病、糖(tang)尿病和神(shen)經(jing)心理失調(diao)等)過程中發揮重(zhong)要(yao)(yao)作用,已經(jing)成(cheng)為表觀遺傳(chuan)學和表觀基(ji)因組學的(de)(de)重(zhong)要(yao)(yao)研(yan)究內容(rong)。

    DNA甲基化(hua)是表(biao)觀遺傳修(xiu)飾的(de)主要方式,它不改變DNA的(de)一級結(jie)構,卻在(zai)細胞的(de)發育(yu)、基因的(de)表(biao)達、及(ji)基因組(zu)的(de)穩定(ding)性中(zhong)起著(zhu)重要的(de)作(zuo)用。CpG島(dao)的(de)高(gao)甲基化(hua)是腫瘤(liu)中(zhong)存(cun)在(zai)的(de)普遍現象,而啟動子(zi)CpG島(dao)的(de)高(gao)甲基化(hua)是除(chu)突變和(he)缺失外腫瘤(liu)中(zhong)抑癌基因失活的(de)第三種機(ji)制(zhi)。

    因此,基因啟(qi)動子甲(jia)基化(hua)(hua)檢(jian)測(ce)在臨(lin)床診(zhen)斷(如甲(jia)基化(hua)(hua)檢(jian)測(ce)與低(di)劑量CT相(xiang)結合)、藥(yao)物敏感性(xing)檢(jian)測(ce)等方(fang)面具有很高的應用價值。

甲基化(hua)特異(yi)性PCR法原理(Methylation-specific PCR,MSP) 

    MSP法的(de)(de)(de)(de)原(yuan)理是(shi)(shi)基(ji)(ji)(ji)(ji)于DNA甲基(ji)(ji)(ji)(ji)轉(zhuan)移酶(DNA methyl-transferase, Dnmt)催(cui)化(hua)(hua)(hua)S-腺苷甲硫氨酸作為甲基(ji)(ji)(ji)(ji)供體,將胞嘧啶(ding)轉(zhuan)變為5-甲基(ji)(ji)(ji)(ji)胞嘧啶(ding)(mC)的(de)(de)(de)(de)一(yi)(yi)種反應,在(zai)真(zhen)核生(sheng)物DNA中(zhong),5-甲基(ji)(ji)(ji)(ji)胞嘧啶(ding)是(shi)(shi)*存在(zai)的(de)(de)(de)(de)化(hua)(hua)(hua)學性修(xiu)飾堿(jian)基(ji)(ji)(ji)(ji)。CG二核苷酸是(shi)(shi)zui主要(yao)的(de)(de)(de)(de)甲基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua)位(wei)點,它(ta)在(zai)基(ji)(ji)(ji)(ji)因組(zu)中(zhong)呈不均勻分布,存在(zai)高(gao)甲基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua)、低甲基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua)和非甲基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua)的(de)(de)(de)(de)區域,在(zai)哺(bu)乳動物中(zhong)mC約占(zhan)C總量的(de)(de)(de)(de)2-7%。一(yi)(yi)般說來,DNA的(de)(de)(de)(de)甲基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua)會抑制基(ji)(ji)(ji)(ji)因的(de)(de)(de)(de)表達;針對特定區域設計(ji)引物,再進行PCR擴增,甲基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua)的(de)(de)(de)(de)位(wei)點可以被當作一(yi)(yi)個C/T的(de)(de)(de)(de)SNP來處(chu)理;可利(li)用直接測(ce)序法來判斷是(shi)(shi)否CpG位(wei)點發生(sheng)甲基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua)。具有(you)方便快捷,靈敏度高(gao)的(de)(de)(de)(de)優點,是(shi)(shi)目前較為常用的(de)(de)(de)(de)甲基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua)檢測(ce)方法。

 MSP實(shi)驗流程:

1.基因組DNA制(zhi)備,樣本類型有:組織,血液,細胞(bao),毛發,唾(tuo)液等。

2.經亞(ya)硫(liu)酸氫(qing)鈉處(chu)理后(hou),未甲基(ji)化(hua)(hua)的胞嘧啶發生脫氨(an)基(ji)變為尿嘧啶,而甲基(ji)化(hua)(hua)的胞嘧啶則不(bu)變。

3.DNA修(xiu)飾后,進行純化(hua)及回(hui)收。 

4.修(xiu)飾后的DNA進行PCR擴(kuo)增。

5.電(dian)泳或直接測(ce)序檢測(ce)

6.實驗報告(包(bao)括MSP基因(yin)組DNA,PCR產物及(ji)電泳照片)

樣品要求
1、基因組DNA(≥1µg),純度(OD:1.9-2.0)
2、若提供的材料為新鮮組織、血液、細胞等生物材料,請提供足夠提取1µg以上基因組DNA的材料量。
3.樣本(ben)運輸途中,需要加(jia)冰(bing)袋(dai),或干(gan)冰(bing)。

 

 

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