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DNA甲基化檢測服務

簡要(yao)描述:用亞硫(liu)酸氫鹽處理基因組DNA,所有(you)未(wei)發(fa)生(sheng)甲(jia)基化的(de)胞嘧啶被轉化為(wei)尿嘧啶,而甲(jia)基化的(de)胞嘧啶不變;隨后設計針對甲(jia)基化和非甲(jia)基化序列的(de)引物(wu)進行PCR。通過電泳檢(jian)測MSP擴增產物(wu),如果(guo)用針對處理后甲(jia)基化DNA鏈的(de)引物(wu)能得(de)到(dao)擴增片(pian)段,則(ze)說(shuo)明該(gai)位點(dian)(dian)存在甲(jia)基化;反(fan)之(zhi),說(shuo)明被檢(jian)測的(de)位點(dian)(dian)不存在甲(jia)基化。

  • 產品型號:
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2023-07-19
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DNA甲基化修飾檢測服務

甲基化特異性的PCR(Methylation-specific PCR,MSP)

用亞硫(liu)酸(suan)氫鹽處(chu)理(li)基(ji)(ji)(ji)(ji)因組DNA,所有未發生甲(jia)基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua)的(de)(de)(de)胞嘧(mi)啶(ding)(ding)被(bei)(bei)轉化(hua)(hua)(hua)為尿嘧(mi)啶(ding)(ding),而(er)甲(jia)基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua)的(de)(de)(de)胞嘧(mi)啶(ding)(ding)不(bu)變;隨后設計針對(dui)甲(jia)基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua)和非甲(jia)基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua)序列的(de)(de)(de)引(yin)物進行PCR。通過電泳檢(jian)測MSP擴(kuo)增(zeng)產物,如果用針對(dui)處(chu)理(li)后甲(jia)基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua)DNA鏈(lian)的(de)(de)(de)引(yin)物能得到擴(kuo)增(zeng)片段,則說明(ming)該位點存在甲(jia)基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua);反之,說明(ming)被(bei)(bei)檢(jian)測的(de)(de)(de)位點不(bu)存在甲(jia)基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua)。

亞硫酸氫鹽測序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)

用亞硫(liu)酸氫(qing)鹽(yan)處理基(ji)因組DNA,則未發生甲基(ji)化(hua)(hua)的胞嘧啶被轉化(hua)(hua)為(wei)尿(niao)(niao)嘧啶,而甲基(ji)化(hua)(hua)的胞嘧啶不(bu)變。隨后(hou)設計BSP引(yin)物(wu)進行(xing)PCR,在擴增(zeng)過程中尿(niao)(niao)嘧啶全部(bu)轉化(hua)(hua)為(wei)胸(xiong)腺(xian)嘧啶,zui后(hou)對PCR產(chan)物(wu)進行(xing)測(ce)序(xu)就可以判斷(duan)CpG位點(dian)是否發生甲基(ji)化(hua)(hua)稱為(wei)BSP-直接測(ce)序(xu)方法(fa)。將PCR產(chan)物(wu)克隆(long)至載體后(hou)進行(xing)測(ce)序(xu),可以提(ti)高測(ce)序(xu)成功率(lv),這種方法(fa)稱為(wei)BSP-克隆(long)測(ce)序(xu)法(fa)。

高分辨率熔解曲線法(High Resolution Melting,HRM)

在非CpG島(dao)(dao)位(wei)置(zhi)設(she)計一對針(zhen)對亞硫酸(suan)氫(qing)鹽(yan)修(xiu)飾后(hou)的(de)(de)(de)DNA雙(shuang)鏈的(de)(de)(de)引(yin)物(wu),這對引(yin)物(wu)中(zhong)間的(de)(de)(de)片段包含(han)感興(xing)趣的(de)(de)(de)CpG島(dao)(dao)。若這些CpG島(dao)(dao)發(fa)生了(le)甲(jia)基化(hua),用(yong)亞硫酸(suan)氫(qing)鹽(yan)處理后(hou),未甲(jia)基化(hua)的(de)(de)(de)胞(bao)嘧啶(ding)經(jing)PCR擴增后(hou)轉(zhuan)變(bian)成胸腺嘧啶(ding),而(er)甲(jia)基化(hua)的(de)(de)(de)胞(bao)嘧啶(ding)不變(bian),樣(yang)品中(zhong)的(de)(de)(de)GC含(han)量發(fa)生改變(bian),從而(er)導致熔解溫(wen)度的(de)(de)(de)變(bian)化(hua)。

DNA甲基化送樣要求:

細胞(≥106 個)、組織(zhi)(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等樣品材料,基(ji)因組DNA(體積≥20μl,濃度(du)≥50 ng/μl)。

DNA甲基化提供結果:

引(yin)(yin)物(wu)(wu)序(xu)列、實驗(yan)(yan)報(bao)告、包括(kuo)MSP產物(wu)(wu)的(de)電泳圖(tu)片;引(yin)(yin)物(wu)(wu)序(xu)列、測序(xu)峰圖(tu)、陽性克隆質(zhi)粒和(he)實驗(yan)(yan)報(bao)告;擴(kuo)增曲(qu)(qu)線、熔解曲(qu)(qu)線及實驗(yan)(yan)報(bao)告。

 

 

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