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熒光定量PCR檢測技術服務-Taqman探針法

簡要描述:熒(ying)光(guang)(guang)定(ding)量PCR技術于1996年由(you)(you)美國Applied Biosystems公司推出,由(you)(you)于該技術不(bu)僅實現了PCR從定(ding)性到(dao)定(ding)量的飛躍,而且與常(chang)規PCR相比,它(ta)具(ju)有特(te)異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化(hua)程度高等特(te)點,目前已得到(dao)廣泛(fan)應用;實時熒(ying)光(guang)(guang)定(ding)量PCR:在PCR反應體系中加入熒(ying)光(guang)(guang)基團(tuan),利用熒(ying)光(guang)(guang)信號積累實時監(jian)測整個(ge)PCR進程,Z后通過標準曲線對未知模板進行定(ding)量分析(xi)的方法。

  • 產品型號:
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2023-07-19
  • 訪  問(wen)  量:4446

實時熒光定量PCR技術(Real Time Quantitative PCR)

在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實(shi)時監測整(zheng)個PCR進程,zui后(hou)通(tong)過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

相對定量應用(yong)(Relative Quantification,RQ)    

 特(te)異(yi)性熒光(guang)標記:

 TaqMan法

 TaqMan探針(zhen)的特性:

(1)5′端標記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC等

(2)3′端標記有熒光淬滅基團(tuan) (Quencher, Q)

(3)探針完整,R所發(fa)射的熒(ying)光能量被Q基(ji)團吸(xi)收 ,無熒(ying)光, R與Q分開,發(fa)熒(ying)光

(4)Taq酶有 5′→3′外切(qie)核酸酶活性,可水解(jie)探針

相對定量通過內標定量:
內(nei)標(biao)(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因(yin)等看家基因(yin),在細胞(bao)中(zhong)的表達量或在基因(yin)組中(zhong)的拷貝數恒定(ding),受(shou)環境(jing)因(yin)素影(ying)響(xiang)小,內(nei)標(biao)定(ding)量結果代表了樣本(ben)中(zhong)所(suo)含細胞(bao)或基因(yin)組數量。

相對定量分析方法  :

 2-ΔΔCt
前提:目標序列和內參序列的擴增效率接近100%且偏差在5%以內
  1、用內參基因的CT值歸一目標基因的CT值:
    ΔCT(test)= CT(target,test)-CT(ref,test) 
    ΔCT(calibrator)= CT(target,calibrator)-CT(ref, calibrator) 
  2、用校準樣本的ΔCT值歸一試驗樣本的ΔCT值:
         ΔΔCT= ΔCT(test) - ΔCT(calibrator)
  3、計算表達水平比率:
                    2 –ΔΔCT=表(biao)達量的(de)比(bi)值

服務流程:

步驟

客 戶 提 供

服 務 內 容

基 屹 提 供

1

新鮮的且(qie)盡量(liang)多的材(cai)料;已知的全長基因序列;盡可能詳細的背景資(zi)料:DNA/ RNA來源、豐度等。

DNA/RNA提取,根(gen)據基因序列設計特異性(xing)的引物和熒光探(tan)針。

 

2

純化好的(de)DNA/RNA(大于5 ug/樣品);已知的(de)全長基因(yin)序列(lie);盡可能詳細的(de)背景(jing)資料:DNA/ RNA來源、豐度等(deng)。

根(gen)據基因序列設計特異性的引物(wu)和熒(ying)光探針。

 

3

 

以DNA為模板,對目的基因進行熒光定量(liang)PCR檢(jian)測分析

提供完整的(de)定(ding)量分析(xi)結果、實(shi)驗熒(ying)光定(ding)量擴增曲(qu)線(xian)及詳細的(de)實(shi)驗步驟。

注(zhu)意(yi):客(ke)戶可根(gen)據(ju)所能提供的起(qi)始材料不同,選擇從步(bu)驟(zou)1或2啟動(dong)項目。

       

 

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