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熒光定量PCR檢測服務-SYBR染料法

簡要(yao)描述:實(shi)時熒光(guang)定(ding)量PCR技(ji)術于(yu)1996年由(you)(you)美國Applied Biosystems公司推(tui)出,由(you)(you)于(yu)該技(ji)術不僅(jin)實(shi)現了(le)PCR從定(ding)性(xing)到定(ding)量的(de)飛躍,而且與常規PCR相比,它具(ju)有特異性(xing)更(geng)強、有效解(jie)決PCR污(wu)染問題、自動化(hua)程度(du)高等特點,目(mu)前已得到廣(guang)泛(fan)應用;實(shi)時熒光(guang)定(ding)量PCR:在PCR反應體系中加入熒光(guang)基(ji)團,利(li)用熒光(guang)信號積累實(shi)時監測整個PCR進(jin)程,Z后通(tong)過標(biao)準曲線對未知模(mo)板進(jin)行定(ding)量分析的(de)方法。

  • 產品(pin)型(xing)號(hao):
  • 廠(chang)商性質:生產廠家
  • 更新時間:2023-07-19
  • 訪  問(wen)  量:2771

實時熒光定量PCR(Real Time Quantitative PCR)

在PCR反應體系中加(jia)入熒光基團,利用(yong)熒光信號積累實時(shi)監測整個(ge)(ge)PCR進程,zui后通過(guo)標(biao)準曲線對未(wei)知(zhi)模板進行(xing)定量(liang)分(fen)析的方法。相對定量(liang)用(yong)于測定一(yi)個(ge)(ge)測試(shi)樣(yang)本(ben)中目標(biao)核酸序列(lie)與(yu)校正樣(yang)本(ben)中同(tong)一(yi)序列(lie)表達的相對變化。校正樣(yang)本(ben)可以是一(yi)個(ge)(ge)未(wei)經處(chu)(chu)理的對照或者是在一(yi)個(ge)(ge)時(shi)辰(chen)研究中處(chu)(chu)于零時(shi)的樣(yang)本(ben)。

相對定量應用(Relative Quantification,RQ)

非特異性熒光標記:

1、SYBR Green

   SYBR Green特性:

(1)只(zhi)有和雙鏈(lian)DNA結合(he)后才發熒光。

(2)變性時,DNA雙(shuang)鏈分開,無熒光。

(3)在延(yan)伸結束階段采集熒光(guang)信號。

(4)SYBR Green也能(neng)和(he)非(fei)特(te)異性的雙鏈DNA結合(he)發(fa)光,所以必須在(zai)反應(ying)結束時做熔解(jie)曲線分(fen)析。

相對定量通過內標定量:
內標(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基(ji)因(yin)等看家基(ji)因(yin),在(zai)細(xi)胞中(zhong)的表達量(liang)或在(zai)基(ji)因(yin)組中(zhong)的拷貝數(shu)恒定,受(shou)環(huan)境因(yin)素影響小,內標定量(liang)結果代表了樣(yang)本中(zhong)所(suo)含細(xi)胞或基(ji)因(yin)組數(shu)量(liang)。

 

相對定量分析方法:

2-ΔΔCt
前提:目標序列和內參序列的擴增效率接近100%且偏差在5%以內
  1、用內參基因的CT值歸一目標基因的CT值:
    ΔCT(test)= CT(target,test)-CT(ref,test) 
    ΔCT(calibrator)= CT(target,calibrator)-CT(ref, calibrator) 
  2、用校準樣本的ΔCT值歸一試驗樣本的ΔCT值:
         ΔΔCT= ΔCT(test) - ΔCT(calibrator)
  3、計算表達水平比率:
                    2 –ΔΔCT=表(biao)達量的比值

服務流程:

步驟

客 戶 提 供

服 務 內 容

基 屹 提 供

1新鮮的且盡量多的材料;已知的全長基因序列;盡可能詳細的背景資料:DNA/ RNA來源、豐度等。DNA/RNA提取,根據基因序列設計特異性的引物和熒光探針。 
2純化好的DNA/RNA(大于5 ug/樣品);已知的全長基因序列;盡可能詳細的背景資料:DNA/ RNA來源、豐度等。根據基因序列設計特異性的引物和熒光探針。 
3 以DNA為模板,對目的基因進行熒光定量PCR檢測分析提供完整的定量分析結果、實驗熒光定量擴增曲線及詳細的實驗步驟。

注(zhu)意:客(ke)戶可(ke)根據所能提供的(de)起始材料(liao)不同,選擇(ze)從步驟1或2啟(qi)動項目。

 

 

 

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